Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) – метод исследования тканей с помощью антител, которые связываются с определёнными молекулярными мишенями в клетках. Он широко применяется в патологической анатомии, прежде всего при диагностике опухолевых заболеваний.
ИГХ дополняет морфологическое исследование и помогает уточнить тип и характеристики новообразования. Результаты также могут иметь прогностическое значение и использоваться при выборе лекарственной терапии.
Результат ИГХ показывает наличие и особенности определённых маркеров в исследуемой ткани. Эти данные не оценивают изолированно: их значение зависит от заболевания, исследованного материала и результатов других методов диагностики.
ИГХ исследования – что это такое
ИГХ – метод, который используют в патологической анатомии для выявления определённых белков и других антигенов в клетках и тканях. Исследование дополняет обычное морфологическое исследование и помогает уточнить происхождение и тип опухоли, провести дифференциальную диагностику, а также определить некоторые прогностические и предиктивные маркеры.
Лимфоидные и другие опухоли кроветворной системы включают множество различных заболеваний, которые могут иметь сходную морфологическую картину. Для точной классификации нередко используют сочетание морфологического, иммуногистохимического, цитогенетического и молекулярно-генетического исследований.
Некоторые опухоли имеют сходную микроскопическую картину, но различаются по происхождению, прогнозу и подходам к лечению. ИГХ помогает провести дифференциальную диагностику, а в отдельных случаях для уточнения диагноза дополнительно применяют молекулярно-генетические или цитогенетические исследования.
Суть методики
Иммуногистохимия основана на способности антител избирательно связываться с определёнными молекулами – антигенами – в клетках и тканях. Такими мишенями могут быть, например, белки клеточной мембраны, цитоплазмы или ядра.
В лаборатории на подготовленный срез ткани наносят антитела к исследуемому маркеру. Если соответствующий антиген присутствует, антитело связывается с ним, а специальная система детекции позволяет увидеть реакцию под микроскопом. Чаще для этого используют окрашивание препарата, в некоторых методиках – флуоресцентную метку.
Характер и локализация реакции помогают определить наличие исследуемых маркеров. Например, при раке молочной железы с помощью ИГХ оценивают экспрессию рецепторов эстрогена и прогестерона, HER2 и других биомаркеров.
Кому показано
Основная область применения ИГХ – диагностика опухолевых заболеваний. Исследование используют для уточнения происхождения и типа новообразования, дифференциальной диагностики, поиска предполагаемого первичного очага при некоторых метастазах и определения клинически значимых маркеров. ИГХ широко применяют при лимфомах, меланоме, саркомах, нейроэндокринных и многих других опухолях.
ИГХ может применяться и в репродуктивной медицине. Например, при подозрении на хронический эндометрит исследование эндометрия с маркером CD138 помогает выявить плазматические клетки, характерные для этого заболевания. Оценка хронического эндометрита может рассматриваться, в частности, при повторных неудачах имплантации после ЭКО. Необходимость исследования определяет врач с учётом анамнеза и результатов других обследований.
С помощью ИГХ определяют ряд биомаркеров, которые могут иметь диагностическое, прогностическое или терапевтическое значение. К ним относятся:
- рецепторы эстрогена (ER) и прогестерона (PR), которые оценивают, в частности, при раке молочной железы;
- HER2 – белок-рецептор, определение статуса которого имеет значение для выбора HER2-направленной терапии при некоторых опухолях;
- PD-L1 – белок, экспрессию которого определяют при ряде злокачественных опухолей. Результат может иметь значение при выборе иммунотерапии;
- Ki-67 – маркер, используемый для оценки пролиферативной активности опухоли.
Микросателлитная нестабильность (MSI) связана с нарушением системы репарации неспаренных оснований ДНК (MMR). Для оценки MMR-статуса может применяться ИГХ с определением экспрессии белков MLH1, MSH2, MSH6 и PMS2, а MSI определяют молекулярно-генетическими методами. Результаты таких исследований имеют диагностическое и терапевтическое значение при некоторых видах злокачественных опухолей, в том числе при колоректальном раке.
Как подготовиться к ИГХ и сколько ждать результат
Специальная подготовка непосредственно к ИГХ обычно не требуется, поскольку исследование проводят на образце ткани, полученном при биопсии или операции. Если материал уже получен, готовиться к самому ИГХ пациенту не нужно. Подготовка может понадобиться к процедуре получения ткани – в этом случае следует выполнять рекомендации врача.
Какой материал нужен для ИГХ
Если гистологическое исследование проводилось ранее, для ИГХ могут потребоваться парафиновые блоки и гистологические препараты на предметных стёклах. Вместе с ними могут запросить предыдущее патологоанатомическое заключение, выписку и другие медицинские документы.
Если материала недостаточно или его качество не позволяет провести исследование, могут потребоваться дополнительные срезы или другой парафиновый блок. Дальнейшие действия определяет врач в зависимости от клинической ситуации.
Сколько делают ИГХ
Срок готовности ИГХ зависит от количества маркеров, сложности исследования, качества материала и необходимости дополнительных тестов. В разных медицинских организациях он может составлять от нескольких рабочих дней до нескольких недель, поэтому точную дату следует уточнять там, где проводится исследование.
Если врачу-патологоанатому требуются дополнительные маркеры или исследования, срок может увеличиться. Это само по себе не говорит о тяжести заболевания.
Что делать после получения результата ИГХ
Заключение ИГХ нужно показать врачу, который назначил исследование, или профильному специалисту. Результаты оценивают вместе с данными гистологии и других обследований.
Не стоит самостоятельно определять диагноз или прогноз по отдельным показателям и словам «положительный» или «отрицательный». По результатам ИГХ врач может уточнить диагноз, рекомендовать дополнительные исследования или использовать полученные данные при выборе лечения.
Как проводятся ИГХ исследования
Для некоторых маркеров предшествующее лечение может влиять на результаты исследования, поэтому важно учитывать, когда и при каких условиях был получен материал. Возможность проведения ИГХ на ткани, взятой до или после лечения, определяют в зависимости от конкретной диагностической задачи.
Этапы проведения анализа:
- Полученный образец ткани фиксируют, обычно с использованием формалина.
- После фиксации ткань обезвоживают и обрабатывают, а затем заключают в парафин, формируя парафиновый блок.
- Из парафинового блока на микротоме получают тонкие срезы толщиной обычно около 3–5 мкм и помещают их на предметные стёкла.
Когда ткани лежат на стеклах, их обрабатывают маркированными специфическими антителами к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Количество исследуемых маркеров зависит от предполагаемого диагноза и результатов первоначальной морфологической оценки. Иногда достаточно нескольких антител, а в сложных диагностических случаях патолог может использовать более широкую панель маркеров.
После проведения иммуногистохимической реакции врач-патологоанатом оценивает препарат под микроскопом. Учитываются наличие или отсутствие окрашивания, его локализация, интенсивность и доля положительных клеток – конкретные критерии зависят от исследуемого маркера.
Расшифровка результатов ИГХ
Расшифровкой результатов иммуногистохимического исследования занимается врач-патологоанатом. В заключении указывают исследованные маркеры и результаты их оценки, однако единой нормы для ИГХ не существует. Значение показателей зависит от типа и локализации опухоли, особенностей исследуемой ткани, используемого метода оценки и поставленной диагностической задачи.
Набор маркеров подбирают индивидуально. В зависимости от заболевания в заключении могут встречаться Ki-67, рецепторы эстрогена (ER) и прогестерона (PR), HER2, PD-L1 и другие показатели. Они помогают уточнить характеристики новообразования, а некоторые биомаркеры имеют значение при выборе лекарственной терапии.
Что означают показатели ИГХ
Перечень исследуемых маркеров зависит от вида ткани, предполагаемого диагноза и цели исследования. Поэтому отсутствие какого-либо показателя в заключении само по себе не является отклонением.
| Маркер | Что показывает | Для чего оценивают |
|---|---|---|
| Ki-67 | Долю опухолевых клеток с положительной реакцией на Ki-67 | Используется для оценки пролиферативной активности опухоли. Результат обычно выражают в процентах, а его клиническое значение зависит от типа новообразования |
| ER | Экспрессию рецепторов эстрогена | Определяется, в частности, при раке молочной железы и помогает оценить гормональный рецепторный статус опухоли |
| PR | Экспрессию рецепторов прогестерона | Обычно исследуется вместе с ER и также используется для оценки гормонального рецепторного статуса |
| HER2 | Экспрессию белка HER2 на опухолевых клетках | Определение HER2-статуса имеет значение для выбора терапии при некоторых злокачественных опухолях |
| PD-L1 | Экспрессию белка PD-L1 в опухолевой ткани | При некоторых видах рака результат используется как один из биомаркеров при выборе иммунотерапии. Способ оценки и пороговые значения зависят от заболевания и применяемой тест-системы |
Результаты ИГХ нельзя оценивать только по одному показателю. Врач сопоставляет выявленные маркеры с морфологической картиной, клиническими данными и результатами других обследований.
Что означает Ki-67 в результате ИГХ
Ki-67 – белок, связанный с пролиферацией клеток. При иммуногистохимическом исследовании определяют долю опухолевых клеток с положительной реакцией на Ki-67, а результат обычно выражают в процентах.
Чем выше индекс Ki-67, тем больше клеток находится в активных фазах клеточного цикла. Однако универсальной шкалы, по которой определённый процент можно было бы считать низким, высоким или нормальным для всех опухолей, не существует. Пороговые значения и клиническое значение Ki-67 зависят от типа новообразования и конкретной клинической ситуации.
По одному значению Ki-67 нельзя определить стадию рака, индивидуальный прогноз или необходимое лечение. Показатель интерпретируют вместе с морфологическими характеристиками опухоли, другими результатами ИГХ и данными дополнительных исследований.
Заключение ИГХ не следует расшифровывать самостоятельно только по отдельным обозначениям и процентам. Один и тот же показатель может иметь разное клиническое значение при разных опухолях, поэтому результаты должен интерпретировать врач с учётом диагноза и других данных обследования.
Видео
Часто задаваемые вопросы
Чем ИГХ отличается от обычной гистологии?
При гистологическом исследовании врач оценивает строение клеток и тканей под микроскопом. ИГХ дополнительно выявляет определённые молекулярные маркеры с помощью антител, что помогает точнее охарактеризовать новообразование.
Для чего делают ИГХ при онкологии?
Исследование помогает уточнить происхождение и тип опухоли, различить похожие новообразования и оценить клинически значимые биомаркеры. Некоторые результаты ИГХ учитывают при выборе лекарственной терапии.
Что значит положительный результат ИГХ?
Положительная реакция обычно означает, что в исследуемой ткани выявлен определённый маркер, но сама по себе не говорит о тяжести заболевания. Значение результата зависит от конкретного маркера, типа опухоли и других данных обследования.
Зачем делают ИГХ эндометрия при ЭКО?
При подозрении на хронический эндометрит с помощью маркера CD138 можно выявить характерные для этого заболевания плазматические клетки. Такое исследование может рассматриваться при повторных неудачах имплантации после ЭКО по решению врача.
Может ли ИГХ ошибаться?
На результат могут влиять качество и количество материала, условия его обработки и особенности используемой методики. Если полученные данные неоднозначны или не соответствуют другим результатам обследования, врач может рекомендовать дополнительные исследования.
